Zjednodušená trypsinizace buněk

0324480 - FGÚ 2009 RIV CZ cze L - Prototyp, funkční vzorek
Bačáková, Lucie
Zjednodušená trypsinizace buněk.
[A simplified trypsinisation of cells.]
Interní kód: Zjednodušená trypsinizace ; 2007
Technické parametry: Zjednodušená procedura oddělení buněk od kultivační podložky trypsinem a EDTA
Ekonomické parametry: -
Grant CEP: GA AV ČR(CZ) 1QS500110564; GA AV ČR(CZ) KAN400480701; GA AV ČR(CZ) KAN101120701; GA MPO(CZ) 2A-1TP1/073; GA MZd(CZ) NR9358; GA MŠMT(CZ) 2B06173
Výzkumný záměr: CEZ:AV0Z50110509
Klíčová slova: cell culture * cell trypsinization * cell seeding
Kód oboru RIV: EI - Biotechnologie a bionika

Klasický postup zahrnuje odstranění média z kultivační nádoby, opláchnutí buněk fyziologickým roztokem pufrovaným fosfáty (PBS) a přidání určitého relativně velkého objemu roztoku trypsinu či trypsinu-EDTA.Po oddělení od podložky musí být buňky separovány od trypsinu či trypsinu-EDTA centrifugací a dále resuspendovány v kultivačním médiu. Nevýhodou tohoto postupu je však příliš dlouhá expozice buněk. Dochází k nezanedbatelným ztrátám buněk.Vyvinuli jsme zjednodušený, efektivní postup: po odstranění média a opláchnutí PBS jsou buňky 2x po sobě opláchnuty polovinou objemu roztoku trypsinu či trypsinu-EDTA. V lahvi je po opláchnutí ponecháno jen malé množství roztoku, a to pouze takové, aby stačilo k udržení buněk ve vlhkém stavu (tj. např. 0.5 ml na láhev o ploše 25cm2 a 1,5 ml na láhev o ploše 75cm2). Uvolnění buněk napomáháme inkubací v 37oC a jemným třepáním láhví. Poté je resuspendujeme v kultivačním médiu či v jiném roztoku podle účelu jejich dalšího užití

The classical technique involves removing the cell culture medium, rinsing cells with phosphate-buffered saline (PBS) and adding a relatively large volume of trypsin or trypsin-EDTA solution.After release, the cells must be separated from the trypsin or trypsin-EDTA solution by centrifugation. A disadvantage of this approach is a relatively long exposure of cells. In addition, the centrifugation can lead to a considerable cell loss, which is not negligible if only a small amount of cells is available. Therefore we invented the following simplified but highly effective approach: after the medium removal and rinsing cells with PBS, the cells are rinsed twice with a half volume of the trypsin or trypsin-EDTA solution, which we would use for the cell release according the classical procedure. Finally, only a small volume of the solution is left in the flask in order to prevent the cell drying.The cell release is aided by incubation at 37oC and mild shaking the flask
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0172171