Vývoj čipu pro separaci biologických agens pomocí izoelektrické fokusace v rozbíhavém toku

0561395 - ÚIACH 2023 RIV CZ cze K - Konferenční příspěvek (tuzemská konf.)
Duša, Filip - Šalplachta, Jiří - Horká, Marie - Lunerová, K. - Rosenbergová, K. - Kubíček, O.
Vývoj čipu pro separaci biologických agens pomocí izoelektrické fokusace v rozbíhavém toku.
[Development of divergent-flow isoelectric focusing chip for separation of biological agents.]
Sborník abstraktů z 4. ročníku odborné konference Hazmat Protect 2022. Kamenná: SÚJCHBO, v. v. i., 2022 - (Lunerová, K.), s. 11-13. ISBN 978-80-11-01902-0.
[HAZMAT PROTECT 2022. Odborná konference o ochraně proti CBRN látkám /4./. Kamenná (CZ), 14.09.2022-15.09.2022]
Grant CEP: GA MV(CZ) VI04000062; GA MV VI20172020069
Institucionální podpora: RVO:68081715
Klíčová slova: isoelectric focusing * B-agents * chip
Obor OECD: Analytical chemistry
https://hazmat-protect.sujchbo.cz

Izoelektrická fokusace (IEF) je účinnou metodou schopnou separovat jednotlivé druhy bakterií. IEF v rozbíhavém toku (DF-IEF) umožnuje kontinuálně separovat větší objem vzorku a separované analyty jímat do frakcí k pozdější analýze. Těchto vlastností bylo využito při vývoji DF-IEF čipu pro separaci biologických agens (B-agens) inaktivovaných parami H2O2. Čip byl navržen pro separaci ve vertikální poloze, která zabránila sedimentaci běžně se vyskytující u bakteriálních vzorků a znemožňující účinnou separaci. Po optimalizaci separační metody za využití barevných markerů izoelektrického bodu byla provedena separace čtyř druhů B-agens. Všechny získané frakce byly dále analyzovány pomocí hmotnostní spektrometrie s matricí asistovanou laserovou desorpcí/ionizací (MALDI-MS). Hmotnostní spektra prokázala účinnost vyvinutého DF-IEF čipu pro separaci inaktivovaných b-agens.

Isoelectric focusing (IEF) is an efficient method for separation of different bacterium species. Divergent flow format of IEF (DF-IEF) enables continual separation of large volumes of samples and fractionation of the separated analytes for later analysis. The mentioned properties enabled development of DF-IEF chip for separation of H2O2 inactivated biological agents (B-agents). The chip was designed to perform separation in vertical alignment which solved issues connected with sedimentation of bacterial cells. The separation method was optimized using colored markers of isoelectric point and four different b-agents were separated using the DF-IEF chip. The obtained fractions were subsequently analyzed with matrix assisted laser desorption/ionization mass spectrometry (MALDI-MS). The mass spectra proved that the developed DF-IEF chip is an effective tool for separation of inactivated B-agents.
Trvalý link: https://hdl.handle.net/11104/0334025