Sada plazmidů pro účinnou expresi rekombinatní lidské IgG protilátky trastuzumab (Herceptin) a jejího derivátu trastuzumab Cys140 v rostlinách

0552362 - ÚEB 2022 RIV CZ cze L - Prototyp, funkční vzorek
Moravec, Tomáš - Vítek, Radovan - Svobodová, Jitka - Kratochvílová, Kateřina - Čeřovská, Noemi
Sada plazmidů pro účinnou expresi rekombinatní lidské IgG protilátky trastuzumab (Herceptin) a jejího derivátu trastuzumab Cys140 v rostlinách.
[Set of plasmid for the efficient expression of recombinant human IgG trastuzumab antibody (Herceptin) and its Cys140 derivative in plants.]
Interní kód: TP01010037_1310 ; 2021
Technické parametry: Celková velikost plazmidu – 15639 bp, celková velikost T-DNA 9040 bp, počet kazet – 3 exprimující protein, 2 x MAR sekvence, selekční marker v E.coli a A. tumefaciens – Spektinomycin, selekční marker v rostlinách – není. Replikační počátky pMB1 a pVS1 ori
Ekonomické parametry: Plazmid umožňuje produkci a akumulaci značného množství důležité chimerické monoklonální protilátky anti-Her2 (Herceptin®). Protilátky anti-Her2 jsou důležitou složkou protinádorových konjugátů s léčivy. Produkce protilátek v rostlinách je oproti produkci v buněčných kulturách ekonomicky velmi výhodná.
Grant CEP: GA TA ČR(CZ) TP01010037
Institucionální podpora: RVO:61389030
Klíčová slova: synthetic biology * monoclonal antibody * expression system
Obor OECD: Biochemistry and molecular biology

Sada vektorů, z nichž každý sestává z celkem pěti nezávislých kazet. Dvě z nich obsahují kodónově optimalizovaný gen pro expresi těžkého, respektive lehkého řetězce lidské IgG protilátky. V jedné verzi je těžký řetězec modifikován mutací S140C, která umožňuje cílenou chemickou konjugaci léčiv s protilátkou. Geny pro lehký a těžký řetězec protilátky trastuzumab jsou pod kontrolou 35S promotoru a terminátoru z viru CaMV a 5 i 3 NTR oblastmi z viru CPMV. Jako signální peptid je použit H7 peptid lidské IgG. Dále vektor obsahuje kazetu zajišťující expresi supresoru genového silencingu P19 z viru TBSV. Na zbývajících dvou pozicích jsou sekvence MAR z tabáku (RB7 a TM2), které zvyšují expresi v rostlinách. Tento vektor v listech tabáku vede k silné expresi protilátky trastuzumab (herceptin) nebo jejího Cys140 derivátu. 5 až 7 dní po infiltraci lze z listů extrahovat a například afinitní chromatografií vyizolovat lidskou monoklonální IgG protilátku Trastuzumab.

A set of vectors, each of which consists of a total of five independent cassettes. Two of them contain a codon-optimised gene for the expression of the heavy and light chain, respectively, of a human IgG antibody. In one version, the heavy chain is modified by the S140C mutation, which allows targeted chemical conjugation of drugs to the antibody. The light and heavy chain genes of the trastuzumab antibody are under the control of the 35S promoter and terminator of CaMV and the 5 and 3 NTR regions of CPMV. The H7 peptide of human IgG is used as a signal peptide. The vector also contains a cassette expressing the P19 gene silencing suppressor from TBSV virus. The remaining two positions contain the MAR sequences from tobacco (RB7 and TM2) that increase expression in plants. This vector leads to strong expression of the antibody trastuzumab (Herceptin) or its Cys140 derivative in tobacco leaves. 5 to 7 days after infiltration, the human monoclonal IgG antibody Trastuzumab can be extracted from the leaves and isolated, e.g. by affinity chromatography.
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0327507