Sada plazmidů pro snadnou přípravu vícekazetových expresních vektorů zejména pro použití v rostlinách

0552361 - ÚEB 2022 RIV CZ cze L - Prototyp, funkční vzorek
Moravec, Tomáš - Svobodová, Jitka - Kratochvílová, Kateřina - Čeřovská, Noemi
Sada plazmidů pro snadnou přípravu vícekazetových expresních vektorů zejména pro použití v rostlinách.
[Set of plazmids for simple assembly of multicassete expression vectors, preferably for use in plants.]
Interní kód: TP01010037_1309 ; 2021
Technické parametry: Celková velikost plazmidu alpha- Pink s růžovou selekční kazetou je 3545, T-DNA má velikost 1026 bp. Velikost plazmidu alpha Lime se zelenou fluorescenční kazetou je 3557 a její T-DNA je 1038. U obou je selekční marker v E.coli a A. tumefaciens kanamycin, selekční marker v rostlinách není. Replikační počátky pUC a pSA ori. Celková velikost plazmidu pLX Delta je 3352 bp, T-DNA podle velikosti inzertu, selekční marker je Spektinomycin, replikační počátek pRK2. Celková velikost plazmidu pDB3 Delta je 7297 bp, T-DNA podle velikosti inzertu, selekční marker je Spektinomycin, replikační počátek pMB1 a pVS1
Ekonomické parametry: Tato sada vektorů umožňuje a usnadňuje jednokrokové kombinační klonování vícekazetových konstruktů dle standardu GoldenBraid. Šetří se tím čas i náklady. V neposlední řadě je použitý enzym BsaI levnější a robustnější než enzym BsmBI, který se jinak používá k získání podobných konstruktů ve dvou krocích
Grant CEP: GA TA ČR(CZ) TP01010037
Institucionální podpora: RVO:61389030
Klíčová slova: general cloning vector * monoclonal antibody * expression system
Obor OECD: Biochemistry and molecular biology

Sada několika nových plazmidů rozšiřujících schopnosti systémů GoldenBraid a MoClo. Sada sestává z upravených cílových plazmidů pLX a pDB3 Omega, ze kterých byly odstraněny vnější restrikční místa BsaI, která byla nahrazena místy BpiI. Další komponentou jsou upavené plazmidy řady alfa, které obsahují vnitřní místa BsaI a marker, umožňující růžovo-bílou selekci. Sada umožňuje nejprve klasickým klonováním dle GoldenBraid standardu sestavit master Delta vektor se všemi potřebnýmí kazetami kromě jedné, na jejímž mstě je alfa kazeta s růžovým selekčním markerem. Do tohoto master vektoru lze potom klonovat BsaI reakcí libovolnou kazetu přímo z domestikovaných základních dílů GB nebo MoClo levelu 0. Je to velmi vhodné pro opakované klonovaní komplexních vícekazetových konstruktů, ve kterých se obměňuje pouze jedna kazeta.

Set of novel plasmids that extend the capabilities of the GoldenBraid and MoClo systems. The set includes modified destination plasmids pLX and pDB3 Omega, in which the restriction sites BsaI have been removed and replaced with BpiI sites. Another component is modified alpha-level plasmids that contain new internal BsaI sites and a selectable pink marker. The entire set makes it possible to construct a multicassette master Delta plasmid that contains all the necessary components except for one cassette, which is occupied by the pink alpha plasmid. It is then possible to use this novel custom-made master vector to assemble any novel cassette from basic level 0 parts (GB or Moclo). It is particularly advantageous for the repeated construction of complex multicassette constructs where one cassette is variable.
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0327506