Plazmid pro účinnou expresi rekombinatní myší IgG protilátky Bg1, která má inhibiční účinky na KOD polymerázu

0552358 - ÚEB 2022 RIV CZ cze L - Prototyp, funkční vzorek
Moravec, Tomáš - Vítek, Radovan - Svobodová, Jitka - Kratochvílová, Kateřina - Čeřovská, Noemi
Plazmid pro účinnou expresi rekombinatní myší IgG protilátky Bg1, která má inhibiční účinky na KOD polymerázu.
[Plasmid for efficient expression of recombinant mouse IgG antibody Bg1 with KOD DNA polymerase inhibitory activity.]
Interní kód: TP01010037_1306 ; 2021
Technické parametry: Celková velikost plazmidu – 14835 bp, celková velikost T-DNA 8222 bp, počet kazet – 3 exprimující protein, 2 x MAR sekvence, selekční marker v E.coli a A. tumefaciens – Spektinomycin, selekční marker v rostlinách – není. Replikační počátky pMB1 a pVS1 ori
Ekonomické parametry: Plazmid umožňuje produkci a akumulaci značného množství důležité monoklonální protilátky proti KOD polymeráze. Protilátky proti polymeráze KOD jsou důležitou složkou speciálních premixů pro PCR. Produkce protilátek v rostlinách je oproti produkci v buněčných kulturách ekonomicky velmi výhodná
Grant CEP: GA TA ČR(CZ) TP01010037
Institucionální podpora: RVO:61389030
Klíčová slova: monoclonal antibody * heavy chain * light chain
Obor OECD: Biochemistry and molecular biology

Vektor sestávající z celkem pěti nezávislých kazet. Dvě z nich obsahují kodónově optimalizovaný gen pro expresi těžkého, respektive lehkého řetězce myší IgG protilátky Bg1. V tomto vektoru je protilátka Bg1 s inhibičními účinky na KOD DNA polymerázu pod kontrolou 35S promotoru a terminátoru z viru CaMV a 5 i 3 NTR oblastmi z viru CPMV. Jako signální peptid je použit H7 peptid lidské IgG. Dále vektor obsahuje kazetu zajišťující expresi supresoru genového silencingu P19 z viru TBSV. Na zbývajících dvou pozicích jsou sekvence MAR z tabáku (RB7 a TM2), které zvyšují expresi v rostlinách. Tento vektor v listech tabáku vede k silné expresi protilátky Bg1. 5 až 7 dní po infiltraci lze z listů extrahovat a například afinitní chromatografií vyizolovat myší monoklonální IgG protilátku Bg1.

Vector consisting of a total of five independent cassettes. Two of them contain a codon-optimised gene for the expression of the heavy and light chain, respectively, of a mouse IgG antibody Bg1 (anti-KOD polymerase). The Bg1 antibody is under the control of the 35S promoter and terminator of CaMV and the 5 and 3 NTR regions of CPMV. The H7 peptide of human IgG is used as a signal peptide. The vector also contains a cassette expressing the P19 gene silencing suppressor from TBSV virus. The remaining two positions contain the MAR sequences from tobacco (RB7 and TM2) that increase expression in plants. This vector leads to strong expression of the mouse Bg1 antibody in tobacco leaves. 5 to 7 days after infiltration, the mouse monoclonal IgG antibody Bg1 can be extracted from the leaves and isolated e.g. by affinity chromatography.
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0327503