Plazmid pro účinnou expresi rekombinatní IgG protilátky proti GFP v rostlinách

0552356 - ÚEB 2022 RIV CZ cze L - Prototyp, funkční vzorek
Moravec, Tomáš - Vítek, Radovan - Svobodová, Jitka - Kratochvílová, Kateřina - Čeřovská, Noemi
Plazmid pro účinnou expresi rekombinatní IgG protilátky proti GFP v rostlinách.
[Plasmid for efficient expression of recombinant anti-GFP IgG antibody in plants.]
Interní kód: TP01010037_1303 ; 2021
Technické parametry: Celková velikost plazmidu – 11457 bp, celková velikost T-DNA 4844 bp, počet kazet – 2 exprimující protein, selekční marker v E.coli a A. tumefaciens – Spektinomycin, selekční marker v rostlinách – není. Replikační počátky pMB1 a pVS1 ori
Ekonomické parametry: Plazmid umožňuje produkci a akumulaci značného množství důležité monoklonální protilátky proti proteinu GFP v rostlinách. Produkce protilátek v rostlinách je oproti produkci v buněčných kulturách ekonomicky velmi výhodná.
Grant CEP: GA TA ČR(CZ) TP01010037
Institucionální podpora: RVO:61389030
Klíčová slova: synthetic biology * plants * matrix attachment region
Obor OECD: Biochemistry and molecular biology

Vektor odvozený z plazmidu pDelta sestávající ze dvou nezávislých kazet. Jedna z nich obsahuje kodónově optimalizovaný gen pro expresi těžkého řetězce IgG protilátky antiGFP. V tomto vektoru je vložena jednořetězcová protilátka 3OGO se specifitou proti GFP z lamy alpaky. Protilátka je pod kontrolou 35S promotoru a terminátoru z viru CaMV a 5 i 3 NTR oblastmi z viru CPMV. Jako signální peptid je použit H7 peptid lidské IgG, protilátka má navíc na C konci 6xHis kotvu pro izolaci . Dále vektor obsahuje kazetu zajišťující expresi supresoru genového silencingu P19 z viru TBSV. Tento vektor v listech tabáku vede k silné expresi protilátky M2 , anti FLAG. 5 až 7 dní po infiltraci lze z listů extrahovat a například afinitní IMAC-chromatografií vyizolovat monoklonální jendořetezcovou IgG protilátku

Vector derived from the plasmid pDelta, consisting of two independent cassettes. One contains a codon-optimised gene for expression of the IgG heavy chain of an anti-GFP antibody. A single chain llama alpaca 3OGO antibody with specificity against GFP is inserted into this vector. The antibody is under the control of the 35S promoter and terminator of CaMV and the 5 and 3 NTR regions of CPMV. The H7 peptide of human IgG is used as the signal peptide, and the antibody also has a 6xHis anchor at the C-terminus for isolation. The vector also contains a cassette expressing the P19 gene silencing suppressor from TBSV virus. This vector results in strong expression of the M2 antibody, anti- FLAG, in tobacco leaves. 5 to 7 days after infiltration, a monoclonal single-chain IgG antibody can be extracted from the leaves, for example by IMAC affinity chromatography.
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0327501