Plazmid pro účinnou expresi rekombinatní myší IgG protilátky M2(anti-FLAG epitope) v rostlinách

0552299 - ÚEB 2022 RIV CZ cze L - Prototyp, funkční vzorek
Moravec, Tomáš - Vítek, Radovan - Svobodová, Jitka - Čeřovská, Noemi - Kratochvílová, Kateřina
Plazmid pro účinnou expresi rekombinatní myší IgG protilátky M2(anti-FLAG epitope) v rostlinách.
[Plasmid for efficient expression of recombinant mouse IgG antibody M2 (anti-FLAG epitope) in plants.]
Interní kód: TP01010037_1302 ; 2021
Technické parametry: Celková velikost plazmidu – 15639 bp, celková velikost T-DNA 9040 bp, počet kazet – 3 exprimující protein, 2 x MAR sekvence, selekční marker v E.coli a A. tumefaciens – Spektinomycin, selekční marker v rostlinách – není. Replikační počátky pMB1 a pVS1 ori
Ekonomické parametry: Plazmid umožňuje produkci a akumulaci značného množství důležité monoklonální protilátky M2 proti eitopu FLAG v rostlinách. Produkce protilátek v rostlinách je oproti produkci v buněčných kulturách ekonomicky velmi výhodná.
Grant CEP: GA TA ČR(CZ) TP01010037
Institucionální podpora: RVO:61389030
Klíčová slova: expression system * monoclonal antibody * heavy chain
Obor OECD: Biochemistry and molecular biology

Vektor sestávající z celkem pěti nezávislých kazet. Dvě z nich obsahují kodónově optimalizovaný gen pro expresi těžkého, respektive lehkého řetězce myší IgG protilátky M2. V tomto vektoru je vložena protilátka M2 (anti-FLAG epitope) pod kontrolou 35S promotoru a terminátoru z viru CaMV a 5 i 3 NTR oblastmi z viru CPMV. Jako signální peptid je použit H7 peptid lidské IgG. Dále vektor obsahuje kazetu zajišťující expresi supresoru genového silencingu P19 z viru TBSV. Na zbývajících dvou pozicích jsou sekvence MAR z tabáku (RB7 a TM2), které zvyšují expresi v rostlinách. Tento vektor v listech tabáku vede k silné expresi protilátky M2 , anti FLAG. 5 až 7 dní po infiltraci lze z listů extrahovat a například afinitní chromatografií vyizolovat myší monoklonální IgG protilátku M2

Vector consisting of a total of five independent cassettes. Two of them contain a codon-optimised gene for the expression of the heavy and light chain, respectively, of a mouse IgG antibody M2 (anti-FLAG epitope). The M2 antibody is under the control of the 35S promoter and terminator of CaMV and the 5 and 3 NTR regions of CPMV. The H7 peptide of human IgG is used as a signal peptide. The vector also contains a cassette expressing the P19 gene silencing suppressor from TBSV virus. The remaining two positions contain the MAR sequences from tobacco (RB7 and TM2) that increase expression in plants. This vector leads to strong expression of the mouse M2 antibody in tobacco leaves. 5 to 7 days after infiltration, the mouse monoclonal IgG antibody M2 can be extracted from the leaves and isolated e.g. by affinity chromatography.
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0327430