Biochemické motody jako nástroj pro studium proteinů v reprodukci

0463069 - BTÚ 2017 CZ cze K - Konferenční příspěvek (tuzemská konf.)
Postlerová, Pavla - Zigo, Michal - Pohlová, Alžběta - Jonáková, Věra
Biochemické motody jako nástroj pro studium proteinů v reprodukci.
[Biochemical methods as tool for study of reproductive proteins.]
Sborník přednášek a posterů XXV. Biochemický sjezd. Praha: Česká společnost pro biochemii a molekulární biologii, 2016 - (Pačes, V.; Stiborová, M.; Turňa, J.), s. 60-60
[XXV. Biochemický sjezd. Praha (CZ), 13.09.2016-16.09.2016]
Grant CEP: GA MŠMT(CZ) ED 1.1.00/02.0109; GA ČR(CZ) GA 14-05547S
Klíčová slova: protein extraction * chromatography * ligands * sperm surface proteins
Kód oboru RIV: CE - Biochemie

Studium molekulárních mechanismů rerodukce je důležité pro pochopení tohoto děje. pro extrakci proteinů ze spermií využíváme různé přístupy a specializované kity, které izolují proteiny z různých částí a povrchu spermatické buňky. Proteiny z reprodukčních tekutin dělíme pomocí chromatografických metod. Charakterizaci a porovnání proteinů získaných odlišnými extrakčními metodami nebo proteinů různých savčích druhů a proteinů spermií, které jsou v rozdílných stádiích svého vývoje, provádíme pomocí SDS a 2D elektroforézy. Elektroforeticky separované proteiny přenesené na NC membránu využíváme pro detekci pomocí protilátek nebo k vazebnýcm studiím s biotinem značenými ligandy. Izolace proteinů z reprodukčních tkání a tekutin a jejich detekce pomocí protilátek je nezbytná pro určení původu proteinů reprodukčního traktu. Lokalizace proteinů na povrchu a uvnitř spermatických buněk a v sekreční tkáni reprodukčních orgánů studujeme pomocé imunofluorescenční mikroskopie. Cílená izolace určitých proteinů spermatické buňky, jejich lokalizace na spermiích nebo v tekutinách a tkáních reprodukčního traktu slouží jako nepostradatelné nástroje pro studium molekulárních mechanismů reprodukčního procesu.

Study of molecular mechanisms in reproduction is essential for the understanding of this outstanding process. Our lab studies proteins secreted by reproductive organs and sperm using various biochemical methods for a long time. We have expertise in protein extraction from spermatic cells using different approaches, and by kits for proteins from the sperm surface and distinct subcellular compartments. The proteins of reproductive organ fluids are separated by chromatographic methods, such as size exclusion chromatography, high-performance liquid chromatography with reverse phase (RP-HPLC) and affinity chromatography on matrices with various ligands. Proteins are subjected to SDS- or 2D-electrophoresis for their characterization and comparison of various extraction methods, different mammalian species, and sperm in different functional development. Electrophoretically separated proteins may be transferred onto nitrocellulose membrane (Western blot) for antibody detection or binding studies with lectin-labelled ligands (lectins, polysaccharides, zona pellucida glycoproteins). We use immunoprecipitation method with specific antibody for protein determination followed by the MALDI identification. Proteins are localized by immunofluorescent techniques on/in spermatic cells and tissue sections of reproductive organs. Isolation of proteins from reproductive tissues and fluids, and the antibody detection is crucial for the studying of reproductive protein origin.
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0262881