Optimalizovaný protokol pro transgenezi hlodavců pomocí transpozonových vektorů Sleeping Beauty

0427117 - FGÚ 2016 RIV CZ cze Z - Poloprovoz, ověřená technologie, odrůda/plemeno
Pravenec, Michal - Landa, Vladimír - Zídek, Václav - Uhlík, L.
Optimalizovaný protokol pro transgenezi hlodavců pomocí transpozonových vektorů Sleeping Beauty.
[Optimized protocol for rodent transgenesis with the Sleeping Beauty transposon vectors.]
Interní kód: Protokol SB transgeneze ; 2013
Technické parametry: Technické parametry výsledku jsou detailně popsané v článku Ivics, Landa, Zídek, Pravenec et al. Germline transgenesis in rodents by pronuclear microinjection of Sleeping Beauty transposons. Nature Protocols 9: 773-793, 2014
Ekonomické parametry: Dílčí výsledek, který umožní efektivní transgenezi pro produkci transgenních potkanů pro biomedicínský výzkum
Grant CEP: GA TA ČR(CZ) TA02010013
Institucionální podpora: RVO:67985823
Klíčová slova: transposon transgenesis * Sleeping Beauty * rat
Kód oboru RIV: EB - Genetika a molekulární biologie

Protokol je založený na injekci prvojader oplozených oocytů směsí syntetické mRNA, kódující SB100X hyperaktivní transpozázu společně s cirkulární plasmidovou DNA nesoucí transgenní konstrukt, který má po stranách vazebná místa pro transpozázu. Po translaci transpozázové mRNA dojde k enzymatické excizi transgenní kazety z plazmidové DNA a následné permanentní inzerci do genomu. Vysoce efektivní transgeneze pomocí tohoto protokolu trvá přibližně 3 měsíce

The procedure is based on co-injection of synthetic mRNA encoding the SB100X hyperactive transposase, together with circular plasmid DNA carrying a transgene construct flanked by binding sites for the transposase, into the pronuclei of fertilized oocytes. Upon translation of the transposase mRNA, enzyme-mediated excision of the transgene cassettes from the injected plasmids followed by permanent genomic insertion. Highly effective transgenesis by using this protocol takes approximately 3 months
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0232755