Transient expression of fusion gene coding for the HPV-16 epitopes fused to the sequence of potyvirus coat protein using different means of inoculation of Nicotiana benthamiana and Brassica rapa, cv. Rapa plants

0320736 - ÚEB 2009 RIV NL eng J - Článek v odborném periodiku
Hoffmeisterová, Hana - Čeřovská, Noemi - Moravec, Tomáš - Plchová, Helena - Kmoníčková, Jitka - Velemínský, Jiří
Transient expression of fusion gene coding for the HPV-16 epitopes fused to the sequence of potyvirus coat protein using different means of inoculation of Nicotiana benthamiana and Brassica rapa, cv. Rapa plants.
[Transientní exprese fúzního genu kódujícího HPV-16 epitopy připojené k sekvenci obalového proteinu potyvirů pomocí různých způsobů inokulace rostlin Nicotiana benthamiana and Brassica rapa, cv. Rapa.]
Plant Cell, Tissue and Organ Culture. Roč. 94, č. 3 (2008), s. 261-267. ISSN 0167-6857. E-ISSN 1573-5044
Grant CEP: GA ČR GA521/06/0973
Výzkumný záměr: CEZ:AV0Z50380511
Klíčová slova: Edible vaccine * epitope expression * E7 oncogen
Kód oboru RIV: EE - Mikrobiologie, virologie
Impakt faktor: 1.017, rok: 2008

We describe the effect of the different means of inoculation of Nicotina benthamiana plants on the amount of transiently expressed fussion gene coding for the Human papillomavirus type 16 (HPV-16) epitopes fused to the sequence of recombinant Potato virus A coat protein (ACP). Epitope derived from minor capsid protein L2 was expressed as an N-terminal fusion with ACP while an epitope derived from E7 oncoprotein was fused to its C-terminus. The 885 bp construct (named L2ACPE7) was cloned into Potato virus X (PVX) based vector pGR106. In our experiments we compared two different means of agrobacterium-mediated infection in N. benthamiana plants; agroinfection using either hypodermic syringe or vacuum infiltration. Furthemore, we describe the possibility of L2ACPE7 expression in an edible plant B. rapa, cv. Rapa. The presence and expression of resulting L2ACPE7 in B.rapa infected plants were confirmed by Immuno-Capture Reverse Trascription PCR (ICRT PCR), Plate-Trapped Antigen ELISA (PTA-ELISA) and SDS-PAGE/ Western blot analysis and compared with the expression in N. benthamiana.

Byl sledován vliv různých způsobů inokulace rostlin Nicotina benthamiana na transientní expresi fúzního genu kódujícího HPV-16 epitopy připojené k sekvenci kapsidového proteinu potyvirů. Epitop odvozený od kapsidového proteinu L2 byl exprimován jako N-terminální fúze obalového proteinu A viru bramboru , kdežto epitop odvozený z E7 onkoproteinu byl fúzován k C-konci. Konstrukt o velikosti 885 bp (pojmenovaný L2ACPE7) byl klonován do vektoru odvozeného od X viru bramboru. V pokusech jsme porovnávali účinek dvou různých způsobů inokulace rostlin N.benthamiana Agrobakteriem: injekční hypodermickou inokulaci a vakuovou infiltraci. Dále je popsána možnost exprese L2ACPE7 v rostlinách B.rapa, cv.Rapa. Přítomnost a exprese L2ACPE7 v B.rapa rostlinách byla potvrzena ICRT PCR, PTA-ELISA a SDS-PAGE Western blot analýzou a porovnána s expresí v N.benthamiana.
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0169521