Expresní vektor, pSPM-CBD, kódující samoštěpitelný afinitní modul odvozený z proteinu FrpC bakterie Neisseria meningitidis určený pro jednostupňovou purifikaci rekombinantních proteinů na chitinové matrici

0312747 - MBÚ 2009 RIV CZ cze L - Prototyp, funkční vzorek
Osička, Radim - Sadílková, Lenka - Linhartová, Irena - Šebo, Peter
Expresní vektor, pSPM-CBD, kódující samoštěpitelný afinitní modul odvozený z proteinu FrpC bakterie Neisseria meningitidis určený pro jednostupňovou purifikaci rekombinantních proteinů na chitinové matrici.
[Expression vector, pSPM-CBD, coding self-processing affinity module derived from the FrpC protein of Neisseria meningitidis for single-step purification of free recombinant proteins on chitin beads.]
Interní kód: pSPM-CBD ; 2008
Technické parametry: Plazmidový rekombinantní DNA konstrukt pro produkci a následnou purifikaci rekombinantních proteinů
Ekonomické parametry: Produkce rekombinantních proteinů pro imunologická stanovení v ČR a na export
Grant CEP: GA AV ČR KAN200520702
Výzkumný záměr: CEZ:AV0Z50200510
Klíčová slova: pSPM-CBD
Kód oboru RIV: EC - Imunologie

Expresní vektor pSPM-CBD nese DNA fragment kódující 250 aminokyselinových zbytků dlouhý samoštěpící modul (SPM) odvozený z proteinu FrpC bakterie Neisseria meningitidis. DNA fragment pro SPM je na 3-konci fúzován ve fázi čtení se sekvencí kódující chitin-vazebnou doménu (CBD) a na 5-konci s klonovacím místem (MCS). MCS bylo navrženo tak, aby do něj mohl být klonován gen pro libovolný rekombinantní protein ve fázi čtení se sekvencí pro SPM-CBD, což umožňuje produkci rekombinantního proteinu fúzovaného k SPM-CBD. Po produkci fúzního proteinu a jeho zachycení k chitinové matrici z buněčného lyzátu jsou kontaminující proteiny odstraněny a pomocí vápenatých iontů je indukováno SPM-zprostředkované štěpení mezi rekombinantním proteinem a SPM-CBD. To vede k uvolnění čistého rekombinantního proteinu z matrice, na kterou zůstává navázán pouze fúzní partner SPM-CBD

The expression vector pSPM-CBD harbors a DNA fragment encoding the 250 amino acid residues long self-processing module (SPM) of the FrpC protein of Neisseria meningitidis, which is fused in frame to a sequence coding for chitin-binding domain (CBD) at the 3-terminus and to a multiple cloning sequence (MCS) at the 5-terminus. The MCS was designed for insertion of a target gene in-frame with the gene for SPM-CBD, thus allowing the expression of a target protein fused to SPM-CBD. After expression of the fusion protein and its binding to chitin matrix from a cell lysate, contaminating proteins are washed out and the SPM-mediated cleavage between recombinant protein and SPM-CBD is induced by calcium ions. It results in release of the free recombinant protein, while the SPM-CBD fusion partner remains trapped on the affinity matrix
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0163728