Number of the records: 1
Zjednodušená trypsinizace buněk
- 1.
SYSNO ASEP 0324480 Document Type L - Prototype, Functional Specimen R&D Document Type Prototype, Functional Specimen RIV Subspecies Functional Specimen Title Zjednodušená trypsinizace buněk Title A simplified trypsinisation of cells Author(s) Bačáková, Lucie (FGU-C) RID, ORCID Year of issue 2007 Int.Code Zjednodušená trypsinizace SResult web page, Location of the result FGU-C Technical parameters Zjednodušená procedura oddělení buněk od kultivační podložky trypsinem a EDTA Economic parameters - Owner Name Fyziologický ústav AVČR v. v. i. Registration Number of the result owner 67985823 Applied result category by the cost of its creation A - Vyčerpaná část nákladů <= 5 mil. Kč Use by another entity N - Využití výsledku jiným subjektem je možné bez nabytí licence License fee fee N - Poskytovatel licence nepožaduje licenční poplatek Language cze - Czech Country CZ - Czech Republic Keywords cell culture ; cell trypsinization ; cell seeding Subject RIV EI - Biotechnology ; Bionics R&D Projects 1QS500110564 GA AV ČR - Academy of Sciences of the Czech Republic (AV ČR) KAN400480701 GA AV ČR - Academy of Sciences of the Czech Republic (AV ČR) KAN101120701 GA AV ČR - Academy of Sciences of the Czech Republic (AV ČR) 2A-1TP1/073 GA MPO - Ministry of Industry and Trade (MPO) NR9358 GA MZd - Ministry of Health (MZ) 2B06173 GA MŠMT - Ministry of Education, Youth and Sports (MEYS) CEZ AV0Z50110509 - FGU-C (2005-2011) Annotation Klasický postup zahrnuje odstranění média z kultivační nádoby, opláchnutí buněk fyziologickým roztokem pufrovaným fosfáty (PBS) a přidání určitého relativně velkého objemu roztoku trypsinu či trypsinu-EDTA.Po oddělení od podložky musí být buňky separovány od trypsinu či trypsinu-EDTA centrifugací a dále resuspendovány v kultivačním médiu. Nevýhodou tohoto postupu je však příliš dlouhá expozice buněk. Dochází k nezanedbatelným ztrátám buněk.Vyvinuli jsme zjednodušený, efektivní postup: po odstranění média a opláchnutí PBS jsou buňky 2x po sobě opláchnuty polovinou objemu roztoku trypsinu či trypsinu-EDTA. V lahvi je po opláchnutí ponecháno jen malé množství roztoku, a to pouze takové, aby stačilo k udržení buněk ve vlhkém stavu (tj. např. 0.5 ml na láhev o ploše 25cm2 a 1,5 ml na láhev o ploše 75cm2). Uvolnění buněk napomáháme inkubací v 37oC a jemným třepáním láhví. Poté je resuspendujeme v kultivačním médiu či v jiném roztoku podle účelu jejich dalšího užití Description in English The classical technique involves removing the cell culture medium, rinsing cells with phosphate-buffered saline (PBS) and adding a relatively large volume of trypsin or trypsin-EDTA solution.After release, the cells must be separated from the trypsin or trypsin-EDTA solution by centrifugation. A disadvantage of this approach is a relatively long exposure of cells. In addition, the centrifugation can lead to a considerable cell loss, which is not negligible if only a small amount of cells is available. Therefore we invented the following simplified but highly effective approach: after the medium removal and rinsing cells with PBS, the cells are rinsed twice with a half volume of the trypsin or trypsin-EDTA solution, which we would use for the cell release according the classical procedure. Finally, only a small volume of the solution is left in the flask in order to prevent the cell drying.The cell release is aided by incubation at 37oC and mild shaking the flask Workplace Institute of Physiology Contact Lucie Trajhanová, lucie.trajhanova@fgu.cas.cz, Tel.: 241 062 400 Year of Publishing 2009
Number of the records: 1