Number of the records: 1
Expresní vektor, pSPM-His, kódující samoštěpitelný afinitní modul odvozený z proteinu FrpC bakterie Neisseria meningitidis určený pro jednostupňovou purifikaci rekombinantních proteinů na Ni-NTA agarose
- 1.
SYSNO ASEP 0312749 Document Type L - Prototype, Functional Specimen R&D Document Type Prototype, Functional Specimen RIV Subspecies Functional Specimen Title Expresní vektor, pSPM-His, kódující samoštěpitelný afinitní modul odvozený z proteinu FrpC bakterie Neisseria meningitidis určený pro jednostupňovou purifikaci rekombinantních proteinů na Ni-NTA agarose Title Expression vector, pSPM-His, coding self-processing affinity module derived from the FrpC protein of Neisseria meningitidis for single-step purification of free recombinant proteins on Ni-NTA agarose Author(s) Osička, Radim (MBU-M) RID, ORCID
Sadílková, Lenka (MBU-M)
Linhartová, Irena (MBU-M) RID, ORCID
Šebo, Peter (MBU-M) RID, ORCIDYear of issue 2008 Int.Code pSPM-His SResult web page, Location of the result Realizátor výsledku Proteix s.r.o., Nad Safinou II/365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy Technical parameters Plazmidový rekombinantní DNA konstrukt pro produkci a následnou purifikaci rekombinantních proteinů Economic parameters Produkce rekombinantních proteinů pro imunologická stanovení v ČR a na export Owner Name Mikrobiologický ústav AV ČR, v. v. i., Vídeňská 1083, 142 20 Praha 4, ČR Registration Number of the result owner 61388971 Applied result category by the cost of its creation A - Vyčerpaná část nákladů <= 5 mil. Kč Use by another entity P - Využití výsledku jiným subjektem je v některých případech možné bez nabytí licence License fee fee Z - Poskytovatel licence nepožaduje v některých případech licenční poplatek Language cze - Czech Country CZ - Czech Republic Keywords pSPM-His Subject RIV EC - Immunology R&D Projects KAN200520702 GA AV ČR - Academy of Sciences of the Czech Republic (AV ČR) CEZ AV0Z50200510 - MBU-M (2005-2011) Annotation Expresní vektor pSPM-His nese DNA fragment kódující 250 aminokyselinových zbytků dlouhý samoštěpící modul (SPM) odvozený z proteinu FrpC bakterie Neisseria meningitidis. DNA fragment pro SPM je na 3-konci fúzován ve fázi čtení se sekvencí kódující šest histidinových zbytků (His) a na 5-konci s klonovacím místem (MCS). MCS bylo navrženo tak, aby do něj mohl být klonován gen pro libovolný rekombinantní protein ve fázi čtení se sekvencí pro SPM-His, což umožňuje produkci rekombinantního proteinu fúzovaného k SPM-His. Po produkci fúzního proteinu a jeho zachycení k Ni-NTA agarose z buněčného lyzátu jsou kontaminující proteiny odstraněny a pomocí vápenatých iontů je indukováno SPM-zprostředkované štěpení mezi rekombinantním proteinem a SPM-His. To vede k uvolnění čistého rekombinantního proteinu z matrice, na kterou zůstává navázán pouze fúzní partner SPM-His Description in English The expression vector pSPM-His harbors a DNA fragment encoding the 250 amino acid residues long self-processing module (SPM) of the FrpC protein of Neisseria meningitidis, which is fused in frame to a sequence coding for six histidine residues (His) at the 3-terminus and to a multiple cloning sequence (MCS) at the 5-terminus. The MCS was designed for insertion of a target gene in-frame with the gene for SPM- His, thus allowing the expression of a target protein fused to SPM-His. After expression of the fusion protein and its binding to Ni-NTA agarose from a cell lysate, contaminating proteins are washed out and the SPM-mediated cleavage between recombinant protein and SPM-His is induced by calcium ions. It results in release of the free recombinant protein, while the SPM-His fusion partner remains trapped on the affinity matrix Workplace Institute of Microbiology Contact Eliška Spurná, eliska.spurna@biomed.cas.cz, Tel.: 241 062 231 Year of Publishing 2009
Number of the records: 1