0172398 - UEB-Q 20033125 RIV CZ cze J - Journal Article
Pejchar, Přemysl - Valentová, O. - Martinec, Jan
Stanovení aktivit rostlinných fosfolipas in situ s využitím fluorescenčně značených substrátů.
[In situ determination of plant phospholipase activities using fluorescently labelled substrates.]
Biologické Listy. Roč. 68, č. 3 (2003), s. 227-234. ISSN 0366-0486
R&D Projects: GA ČR GA522/03/0353
Institutional research plan: CEZ:AV0Z5038910
Keywords : phospholipid signalling pathway * BODIPY-phosphatidylcholine * high performance thin-layer chromatography
Subject RIV: CE - Biochemistry

Fosfolipidová signální dráha je jedním ze základních signálních mechanismů v živočišných i rostlinných buňkách. Klíčovými částmi fosfolipidové signální dráhy jsou fosfolipidy a fosfolipasy, které se dělí dle místa štěpení fosfolipidové molekuly na fosfolipasy A1, A2, C a D. Metoda stanovení fosfolipasových aktivit in situ je založena na inkorporaci fluorescenčně značeného substrátu (BODIPY-fosfatidylcholin) do buněk suspenzních kultur tabáku BY-2 a VBI-0. S výhodou byly použity tři různé typy fluorescenčně značených substrátů, lišících se umístněním fluorescenční značky v molekule fosfolipidu, čímž se docílí rozpoznání všech hlavních produktů reakcí katalyzovaných fosfolipasami. Po ošetření účinnými látkami jsou produkty reakcí extrahovány do organické fáze, analyzovány tenkovrstevnou chromatografií a kvantifikovány.

Phospholipid signalling pathway is one of the basic signalling mechanism in animal as well as plant cells. Phospholipases and phospholipids are the key components of this system. Phospholipases are divided based on the site of cleavage of the phospholipid molecules to phospholipase A1, A2, C and D. In situ determination of phospholipase activities is based on incorporation of fluorescently labelled substrate (BODIPY-phosphatidylcholine) to tobacco cells. Use of three different types of fluorescent labelled substrates that differ in position of fluorescent label in phospholipid molecule help us to identify all main products of reactions catalyzed by phospholipases. The products are extracted after treatment with efficient substances into organic phase, analysed by thin-layer chromatography and quantified.
Permanent Link: http://hdl.handle.net/11104/0069437