0172344 - UEB-Q 20033111 RIV CZ cze J - Journal Article
Gaudinová, Alena - Vaňková, Radomíra - Dobrev, Petre - Motyka, Václav
Extrakce a stanovení aktivity cytokinin N- a O-glukosyltransferas v rostlinných pletivech.
[Extraction and determination of N- and O-glucosyltranferases activity in plant tissues.]
Biologické Listy. Roč. 68, č. 3 (2003), s. 176-179. ISSN 0366-0486
R&D Projects: GA AV ČR IAA6038002; GA ČR GA206/03/0313; GA MŠMT ME 505
Institutional research plan: CEZ:AV0Z5038910
Keywords : cytokinin * glukosyltransferase(s) * enzyme activity
Subject RIV: CE - Biochemistry

V práci je popsán postup extrakce, čištění a stanovení enzymové aktivity cytokinin N- a O-glucosyltransferas katalyzujících v rostlinných pletivech konjugaci cytokininů na glykosidy. Metoda je založena na měření konverse radioaktivně značených substrátových cytokininů (Z pro oba enzymy, BA a DHZ pouze pro cytokinin N-glukosyltransferasu) v testech in vitro. Aktivita obou enzymů se stanovuje po inkubaci částečně purifikovaného bílkovinného preparátu se značeným substrátem v přítomnosti UDPG (donor glukózy) a vyjadřuje se v procentech radioaktivity vzniklých produktů enzymové reakce (cytokinin N- nebo O-glukosidy) po jejich oddělení od nezreagovaného substrátového cytokininu pomocí HPLC nebo v přepočtu na 1 mg bílkovin detekovaných v hrubém extraktu. Zhodnoceny jsou výhody a nevýhody uvedeného postupu.

The procedure for extraction, purification and determination of enzyme activities of cytokinin N- and O-glucosyltransferases catalysing conjugation of cytokinins to corresponding glycosides in plants is described. The method is based on the conversion of radiolabelled substrate cytokinins (Z for both enzymes, BA and DHZ for cytokinin N-glucosyltransferase only) in the in vitro assays. The activities of respective enzymes are being determined after incubation of partially purified protein preparations with the labelled substrate in the presence of UDPG (donor of the glucosyl moiety) and calculated on the basis of measurement of the radioactivity associated with the product(s) of the enzyme reaction (cytokinin N- and/or O-glucosides) after its (their) separation from substrate cytokinin(s) by appropriate chromatographic method (HPLC). Advantages and disadvantages of the described procedure are evaluated.
Permanent Link: http://hdl.handle.net/11104/0069383