0102710 - UEK-B 20043003 RIV NL eng J - Journal Article
Bendikiene, V. - Surinenaite, B. - Juodka, B. - Šafaříková, Miroslava
Insights into catalytic action mechanism of Pseudomonas mendocina 3121-1 lipase.
[Pohled na mechanismus katalýzy lipasy z Pseudomonas mendocina 3121-1.]
Enzyme and Microbial Technology. Roč. 34, - (2004), s. 572-577. ISSN 0141-0229. E-ISSN 1879-0909
R&D Projects: GA AV ČR KSK4055109
Institutional research plan: CEZ:AV0Z6087904
Keywords : Pseudomonas mendocina * lipase
Subject RIV: CE - Biochemistry
Impact factor: 1.759, year: 2004

The hydrolysis of p-nitrophenyl butyrate catalyzed by Pseudomonas mendocina 3121-1 lipase was strongly affected by guanidine hydrochloride indicating the importance of Arg residue. Since loss of the activity in the presence of urea was negligible, the inactivation could not be attributed to protein denaturation. The enzyme was unaffected by p-chlormercuribenzoic acid (p-CMB), 2-mercaptoethanol and N-ethylmaleimide (NEM) at pH 7.0 indicating that Cys residue was essential neither to catalytic action nor to structural features of the lipase. The inactivation by K3Fe(CN)6 implied that another oxidizable amino acid residue could be important. The inactivation by N-ethylmaleimide at pH 9.0 indicated the involvement of His in the catalysis. Phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) strongly inhibited the enzyme pointing out the essential role of Ser residue

Hydrolýza p-nitrofenyl butyrátu katalyzovaná lipasou z Pseudomonas mendocina 3121-1 byla silně ovlivněna guanidin hydrochloridem, ukazujícím podstatný význam argininového zbytku. Protože ztráta aktivity v přítomnosti močoviny byla nevýznamná, inaktivace nemohla být spojována s denaturací proteinu. Enzymová aktivita nebyla ovlivněna kyselinou p-chlormerkuribenzoovou (p-CMB), 2-merkaptoethanolem a N-ethylmaleinimidem (NEM) při pH 7.0, což ukazuje, že cysteinové zbytky nebyly nezbytné ani pro katalytickou aktivaci ani pro strukturální vlastnosti lipasy. Inaktivace působením K3Fe(CN)6 ukázala, že jiný oxidovatelný zbytek aminokyseliny by mohl být důležitý. Inaktivace N-ethylmaleinimidem při pH 9.0 prokázala spoluúčast histidinu v katalýze. Fenylmethylsulfonylchlorid (PMSF) silně inhiboval enzym, což by vysvětlovalo esenciální úlohu serinového zbytku
Permanent Link: http://hdl.handle.net/11104/0010049