Number of the records: 1
Expresní vektor, pSPM-CBD, kódující samoštěpitelný afinitní modul odvozený z proteinu FrpC bakterie Neisseria meningitidis určený pro jednostupňovou purifikaci rekombinantních proteinů na chitinové matrici
- 1.
SYSNO ASEP 0312747 Document Type L - Prototype, Functional Specimen R&D Document Type Prototype, Functional Specimen RIV Subspecies Functional Specimen Title Expresní vektor, pSPM-CBD, kódující samoštěpitelný afinitní modul odvozený z proteinu FrpC bakterie Neisseria meningitidis určený pro jednostupňovou purifikaci rekombinantních proteinů na chitinové matrici Title Expression vector, pSPM-CBD, coding self-processing affinity module derived from the FrpC protein of Neisseria meningitidis for single-step purification of free recombinant proteins on chitin beads Author(s) Osička, Radim (MBU-M) RID, ORCID
Sadílková, Lenka (MBU-M)
Linhartová, Irena (MBU-M) RID, ORCID
Šebo, Peter (MBU-M) RID, ORCIDYear of issue 2008 Int.Code pSPM-CBD SResult web page, Location of the result Realizátor výsledku Proteix s.r.o., Nad Safinou II/365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy Technical parameters Plazmidový rekombinantní DNA konstrukt pro produkci a následnou purifikaci rekombinantních proteinů Economic parameters Produkce rekombinantních proteinů pro imunologická stanovení v ČR a na export Owner Name Mikrobiologický ústav AV ČR, v. v. i., Vídeňská 1083, 142 20 Praha 4 Registration Number of the result owner 61388971 Applied result category by the cost of its creation A - Vyčerpaná část nákladů <= 5 mil. Kč Use by another entity P - Využití výsledku jiným subjektem je v některých případech možné bez nabytí licence License fee fee Z - Poskytovatel licence nepožaduje v některých případech licenční poplatek Language cze - Czech Country CZ - Czech Republic Keywords pSPM-CBD Subject RIV EC - Immunology R&D Projects KAN200520702 GA AV ČR - Academy of Sciences of the Czech Republic (AV ČR) CEZ AV0Z50200510 - MBU-M (2005-2011) Annotation Expresní vektor pSPM-CBD nese DNA fragment kódující 250 aminokyselinových zbytků dlouhý samoštěpící modul (SPM) odvozený z proteinu FrpC bakterie Neisseria meningitidis. DNA fragment pro SPM je na 3-konci fúzován ve fázi čtení se sekvencí kódující chitin-vazebnou doménu (CBD) a na 5-konci s klonovacím místem (MCS). MCS bylo navrženo tak, aby do něj mohl být klonován gen pro libovolný rekombinantní protein ve fázi čtení se sekvencí pro SPM-CBD, což umožňuje produkci rekombinantního proteinu fúzovaného k SPM-CBD. Po produkci fúzního proteinu a jeho zachycení k chitinové matrici z buněčného lyzátu jsou kontaminující proteiny odstraněny a pomocí vápenatých iontů je indukováno SPM-zprostředkované štěpení mezi rekombinantním proteinem a SPM-CBD. To vede k uvolnění čistého rekombinantního proteinu z matrice, na kterou zůstává navázán pouze fúzní partner SPM-CBD Description in English The expression vector pSPM-CBD harbors a DNA fragment encoding the 250 amino acid residues long self-processing module (SPM) of the FrpC protein of Neisseria meningitidis, which is fused in frame to a sequence coding for chitin-binding domain (CBD) at the 3-terminus and to a multiple cloning sequence (MCS) at the 5-terminus. The MCS was designed for insertion of a target gene in-frame with the gene for SPM-CBD, thus allowing the expression of a target protein fused to SPM-CBD. After expression of the fusion protein and its binding to chitin matrix from a cell lysate, contaminating proteins are washed out and the SPM-mediated cleavage between recombinant protein and SPM-CBD is induced by calcium ions. It results in release of the free recombinant protein, while the SPM-CBD fusion partner remains trapped on the affinity matrix Workplace Institute of Microbiology Contact Eliška Spurná, eliska.spurna@biomed.cas.cz, Tel.: 241 062 231 Year of Publishing 2009
Number of the records: 1