Leishmania in sand flies: comparison of quantitative polymerase chain reaction with other techniques to determine the intensity of infection

0318321 - BC 2009 RIV US eng J - Journal Article
Myšková, J. - Votýpka, Jan - Volf, P.
Leishmania in sand flies: comparison of quantitative polymerase chain reaction with other techniques to determine the intensity of infection.
[Leishmania ve flebotomech: srovnání kvantitativní PCR s ostatními technikami kvantifikace infekce.]
Journal of Medical Entomology. Roč. 45, č. 1 (2008), s. 133-138. ISSN 0022-2585. E-ISSN 1938-2928
R&D Projects: GA MŠMT(CZ) LC06009
Grant - others:Univerzita Karlova v Praze(CZ) 195/2005/B-BIO/PrF
Institutional research plan: CEZ:AV0Z60220518
Keywords : sand fly * Leishmania * Phlebotomus * parasite-vector interaction * RT-PCR
Subject RIV: EG - Zoology
Impact factor: 1.967, year: 2008

We compared quantitative polymerase chain reaction (Q-PCR) with two traditional methods, estimation in situ and direct counting with the aid of a hemocytometer, to evaluate their usefulness. Phlebotomus duboscqi and Ph. arabicus were infected with Leishmania major and L. infantum, respectively, and different approaches were compared to determine the intensity of Leishmania infections before and after defecation of the bloodmeal. Estimation of parasite numbers in situ is only a semiquantitative method, but it is quick and provides data about localization of infection. We recommend this technique for low-intensity infections after the bloodmeal is passed. Counting in a hemocytometer is a suitable technique for heavily infected sand flies or for quantification of Leishmania within the bloodmeal. The most accurate approach for parasite quantification in any type of sand fly infection is Q-PCR. This method is also highly sensitive and can detect one parasite per gut.

V rámci této studie jsme porovnávali kvantitativní PCR (Q-PCR) s tradičními metodami k posouzení množství leishmánií v infikovaných vektorech (komárků rodu flebotomus), a to s odhadem infekce při pitvě flebotoma a s počítáním parazitů v počítací komůrce. Použili jsme flebotomy druhů Phlebotomus duboscqi a Ph. arabicus, kteří byli infikování Leishmania major a L. infantum. Stanovení počtu parazitů proběhlo před a po defekaci. Odhad při pitvě flebotoma je pouze semi-kvantitativní metoda, je však rychlá a umožňuje určit přesnou lokalizaci infekce. Stanovení počtu pomocí počítací komůrky je vhodné pouze u flebotomů s nižším počtem parazitů a pouze po defekaci. Jako nejpřesnější metoda se jeví použití Q-PCR, tato metoda je navíc velmi citlivá a dokáže stanovit I jediného parazita ve střevě flebotoma.
Permanent Link: http://hdl.handle.net/11104/0167773