Luminometric method for screening retroviral protease inhibitors

0021541 - ÚOCHB 2006 RIV US eng J - Journal Article
Horáková, D. - Rumlová, Michaela - Pichová, Iva - Ruml, Tomáš
Luminometric method for screening retroviral protease inhibitors.
[Luminometrická metoda pro testování inhibitorů retrovirové proteasy.]
Analytical Biochemistry. Roč. 345, č. 1 (2005), s. 96-101. ISSN 0003-2697. E-ISSN 1096-0309
R&D Projects: GA AV ČR(CZ) IAA4055304; GA MŠMT(CZ) 1M0508; GA MŠMT(CZ) 1M0520
Institutional research plan: CEZ:AV0Z40550506
Keywords : retroviral protease * inhibitors * luminescent assay
Subject RIV: CE - Biochemistry
Impact factor: 2.670, year: 2005

We have developed a sensitive luminometric assay for determining the activity of retroviral proteases that uses proteolytic cleavage of polypeptide substrate derived from the Gag precursor protein of Mason–Pfizer monkey virus (M-PMV) immobilized on Ni–NTA HisSorb Strips microplates. The cleavage of the substrate was monitored as a decrease in luminescent signal caused by the release of the cleavage product conjugated to HRP. Testing of a set of M-PMV protease inhibitors confirmed that this method is suitable for high-throughput screening of retroviral protease inhibitors.

Vyvinuli jsme citlivou luminometrickou metodu pro detekci aktivity retrovirové proteasy, která využívá štěpení substrátu odvozeného z virového polyproteinu opičího Mason-Pfizerova viru imobilizovaného na Ni–NTA HisSorb Strips mikrotitračních destičkách. Štěpení substrátu způsobuje uvolnění produktu konjugovaného k peroxidase a vede ke snížení luminiscenčního signálu. Tato metoda je vhodná pro velkokapacitní testování inhibitorů.
Permanent Link: http://hdl.handle.net/11104/0110507