Спосіб віявлення активні форм аналіту та визначення здатності печовин зв'язуватисвя с активними центрами аналіту

0520778 - ÚOCHB 2020 RIV ukr P - Patent Document
Navrátil, Václav - Šácha, Pavel - Schimer, Jiří - Konvalinka, Jan - Majer, Pavel
Спосіб віявлення активні форм аналіту та визначення здатності печовин зв'язуватисвя с активними центрами аналіту.
[Method of detection of analyte active forms and determination of the ability of substances to bind into analyte active sites.]
2019. Owner: Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. Date of the patent acceptance: 25.06.2019. Patent Number: UA119466
R&D Projects: GA MŠMT LO1302; GA MZd(CZ) NV15-31379A
Institutional support: RVO:61388963
Keywords : DIANA * inhibitor * analyt
OECD category: Biochemical research methods
https://base.uipv.org/searchINV/search.php?action=viewdetails&IdClaim=259456

Винахід пропонує спосіб виявлення активної форми аналітів у зразку та / або визначення здатності досліджуваних речовин зв'язуватися з активним сайтом цих аналітів, що включає наступні етапи: а) аналіт або групу аналітів із зразка іммобілізується на поверхні твердого носія або неспецифічною нековалентною адсорбцією, або ковалентним зв'язуванням поверхневих функціональних груп аналіту і відповідних функціональних груп твердого носія, або переважно через зв'язуючу молекулу, яка пов'язана з поверхнею твердого носія перед іммобілізацією аналіту або групи аналітів і здатний вибірково зв'язувати аналіт або групу аналітиків, що містяться у зразку, під час інкубації твердого носія з зразком, б) аналіт або група аналітів інкубується з зонд виявлення, який селективно зв'язується з аналітом або групою аналітиків через з'єднання для селективного зв'язування з активним сайтом аналіту, тоді як зонд кон складові низькомолекулярної сполуки для селективного зв'язування з аналітичним активним сайтом, олігонуклеотидної міткою, необов'язково з ковалентно приєднаним фторофором, біотином або хімічною групою, і хімічним лінкером, ковалентно зв'язуючим з'єднання для селективного зв'язування з аналітичним активним сайтом і в) олігонуклеотидну мітку, в) потім твердий носій промивають для видалення зонда виявлення без зв’язку, а згодом визначають кількість зв'язаного зонду виявлення, тоді як ця кількість прямо пропорційна кількості аналіту або групи аналітів у зразку. Описаний метод має широке застосування в медицині. Враховуючи виняткову чутливість лише декількох десятків молекул, вона забезпечує можливість визначати білкові маркери в крові в концентрації, яка ще не виявляється.

The invention provides a method for detection of active form of analytes in a sample and/or for determination of ability of tested substances to bind to the active site of these analytes, comprising the following steps: a) analyte or group of analytes from the sample is immobilized on the surface of a solid carrier either by non-specific non-covalent adsorption or by covalent binding of surface functional groups of the analyte and corresponding functional groups of the solid carrier, or preferably via a binding molecule which is bound to the surface of the solid carrier before immobilization of the analyte or group of analytes and is capable of selectively binding the analyte or group of analytes contained in the sample during incubation of the solid carrier with the sample, b) analyte or group of analytes is incubated with a detection probe which binds selectively to the analyte or group of analytes via a compound for selective binding to the analyte active site, whereas the probe consists of a low molecular compound for selective binding to the analyte active site, an oligonucleotide tag, optionally with a covalently attached fluorophore, biotin or a chemical group, and a chemical linker covalently linking the compound for selective binding to the analyte active site and the oligonucleotide tag, c) then the solid carrier is washed to remove unbound detection probe, and subsequently, the amount of bound detection probe is determined, whereas this amount is directly proportional to the amount of the analyte or group of analytes in the sample. The described method has broad application in medicine. Given the exceptional sensitivity of only a few dozen molecules, it provides the ability to determine the protein markers in blood in a concentration yet undetectable.


Permanent Link: http://hdl.handle.net/11104/0306507