Příprava metabolomické analytické metody s manuální přípravou vzorků a její přizpůsobení plně automatizovanému procesu

0443245 - BC 2015 RIV CZ cze Z - Pilot plant, v. technol., variety, breed
Moos, Martin - Hušek, Petr - Šimek, Petr
Příprava metabolomické analytické metody s manuální přípravou vzorků a její přizpůsobení plně automatizovanému procesu.
[Preparation of a metabolomic analytic method with manual sample preparation and its adjustment to a fully automated process.]
Internal code: BCLABkit2015000001 ; 2014
Technical parameters: Komponenty robotického zařízení byly zkonstruovány s využitím součástek pořízených z různých zdrojů, zejména firem CTC Analytics (Zwingen, Švýcarsko), Leap Inc. (USA), Axel Semrau GmBH (Německo) a dalších. Byla optimalizována a otestována mechanika pohybu jednotlivých modulů v x,y,z směru a zhotoven prototyp zařízení. Zařízení bylo připojeno ke GC-MS spektrometru a vyzkoušeny mechanické a elektronické části robotického zařízení pro přípravu vzorků. Pro konstrukci se osvědčily zejména moduly PAL RTC Standart X axis Length 835 mm, PAL RTC Standard Y axis 503 mm Range, PAL RTC Vortex Mixer, PAL RTC Wash Station 5 positions 10 ml vials, PAL RTC Park Station, Active PAL module for automated PALtool change. Zařízení je sestaveno z více jak 30 komponent a po otestování mechanických funkcí bylo robotické zařízení nainstalováno na plynový chromatograf s hmotnostním spektrometrem Trace Ultra GC/DSQ. Propojeny a naprogramovány synchronizační signály, aby sestava umožňovala automatickou sekvenci analýz vzorků.
Economic parameters: BCLABkit zvýší produktivitu zpracování dat na 24 hod. denně 7 dní v týdnu (24/7). Jako optimální základ pro vyvíjenou robotickou platformu byly vybrány komponenty švýcarské firmy CTC Analytics. Konkurenční systémy, spíše průmyslově zaměřené, jsou významně nákladnější a pro laboratorní nasazení nejsou primárně určeny. Tento systém vytváří současně prostor pro využití vlastního programovacího prostředí a umožnuje přesně časovat a optimalizovat jednotlivé sekvence automatického procesu. Jednotlivé moduly stále více disponují vlastní aktivní “inteligencí“, což umožňuje jejich naprogramování podle konkrétní potřeby.
R&D Projects: GA TA ČR TA04011751
Institutional support: RVO:60077344
Keywords : metabolomic analytic method
Subject RIV: CB - Analytical Chemistry, Separation

Podíl 25 µl vzorku moči nebo extraktu séra se nadávkuje do 1ml konické mikrozkumavky a postupně se přidávají za pravidelného míchání: směs interních standardů a následně reakční media (redukční, basické, reakční, katalytické, organické, kyselé). Celá reakční směs je centrifugována na stolní mikrocentrifuze a poté je odebrána vrchní vrstva do speciální skleněné vialky se upravenou skleněnou vložkou, která je uzavřena pomocí teflonového septa. Takto připravený vzorek se přímo dávkuje do plynového chromatografu. Byl zhotoven prototyp kitu BC-HFB a metoda otestována a validována pro analýzu více jak 100 metabolitů v moči.

A 25 µl aliquot of a urine sample or an serum extract is charged in a 1 ml conical vial and the following media are gradually added under regular stirring: a mixture of internal standards and then the reaction media (the reduction, by basic, reaction, catalytic and acidic). The entire reaction mixture is centrifuged by using a portable microcentrifuge, and the upper layer withdrawn into a glass vial with a special modified glass insert, which is closed by a teflon septum. A sample aliquot thus prepared is finally injected into a chromatograph. A prototype of the kit BC-HFB kit was designed, tested and validated for urinary analysis of more than 100 metabolites in urine.
Permanent Link: http://hdl.handle.net/11104/0245999