Expresní vektor, pBSK-Strep-TRItag-TRAIL, obsahující Strep kotvu, trimerizační motif a cDNA lidského ligandu TRAIL (aminokyseliny 95-281)

0353780 - ÚMG 2011 RIV CZ cze L - Prototype, f. module
Anděra, Ladislav
Expresní vektor, pBSK-Strep-TRItag-TRAIL, obsahující Strep kotvu, trimerizační motif a cDNA lidského ligandu TRAIL (aminokyseliny 95-281).
[Expression vector, pBSK-Strep-TRItag-TRAIL, containing Strep Tag, trimerizing motif and human TRAIL cDNA (amino acids 95-281).]
Internal code: pBSK-Strep-TRItag-TRAIL ; 2009
Technical parameters: Plazmidový rekombinantní DNA konstrukt pro produkci modifikovaného rekombinantního ligandu TRAIL, ověřen pro zavedení do výroby
Economic parameters: Produkce rekombinantních proteinů pro funkční analýzu v ČR a na export; uzavřena smlouva o předání výsledku realizátorovi
R&D Projects: GA MŠMT 1M0506
Institutional research plan: CEZ:AV0Z50520514
Keywords : TRAIL * expression vector * Strep
Subject RIV: EB - Genetics ; Molecular Biology

TRAIL, ligand z rodiny TNFa patří (vedle FasL a TNFa) do podskupiny tzv. ligandů smrti, které mohou účinně indukovat buněčnou smrt cílových, např. nádorových buněk prostřednictvím interakce se svými receptory na těchto buňkách a iniciace vzniku multiproteinového proapoptotického komplexu, tzv. DISCu. Připravili jsme plasmid produkující modifikovaný ligand TRAIL obsahující kromě vlastní kódující sekvence také Strep kotvu a trimerizační motiv, který bude mnohem vhodnějším nástrojem pro analýzu DISC komplexů než biotinem značený TRAIL, u něhož chemické značení biotinem výrazně snižuje biologické aktivity. V plasmidu pBSK-HisTRAIL(95-281) byla His6 kotva a sekvence předcházející prvnímu aminokyselině lidského TRAILu nahrazena syntetickou sekvencí obsahující N-terminální STREP tag následovaný trimerizačním motivem odvozeným z T4 bakteriofágového proteinu fibritinu. Exprese Strep-TRItag-TRAILu je indukovatelná arabinózou v transformovaných BL21-AI E.coli plasmidem pBSK-Strep-TRItag-TRAIL.

TRAIL, ligand from TNFa family, belongs to so-called death ligands. These ligands (in addition to TRAIL also FasL and TNFa) can via their cognate receptors efficiently induce cell death of their target, e.g. cancer cells, through the initial formation of the multiprotein, proapoptotic complex DISC. In this applied result we prepared plasmid expressing modified version of the ligand TRAIL containing in addition to the coding sequence also Strep tag and trimerizing motif. This modified TRAIL will be more suitable for DISC analysis/precipitation than via a chemical reaction biotin-labeled TRAIL. In pBSK-HisTRAIL(95-281) plasmid was His6 tag and a linker replaced by synthetic sequence containing N-terminal Strep tag, followed by a trimerizing motif derived from T4 bacteriophage protein fibritin. Expression of Strep-TRItag-TRAIL is arabinose-inducible in pBSK-Strep-TRItag-TRAIL-transformed BL21-AI E.coli.
Permanent Link: http://hdl.handle.net/11104/0192928