Počet záznamů: 1  

Induction, purification and characterization of alfa-N-acetylgalactosaminidase from Aspergillus Niger

  1. 1.
    0311295 - MBU-M 2009 RIV DE eng J - Článek v odborném periodiku
    Weignerová, Lenka - Filipi, Tomáš - Manglová, Dana - Křen, Vladimír
    Induction, purification and characterization of alfa-N-acetylgalactosaminidase from Aspergillus Niger.
    [Indukce, purifikace a charakterizace alfa-N-acetylgalaktosaminidasy z Aspergillus niger.]
    Applied Microbiology and Biotechnology. Roč. 79, č. 5 (2008), s. 769-774. ISSN 0175-7598
    Grant CEP: GA MŠk(CZ) LC06010; GA ČR GA203/05/0172
    Výzkumný záměr: CEZ:AV0Z50200510
    Klíčová slova: aspergillus niger * glycosidase library
    Kód oboru RIV: CF - Fyzikální chemie a teoretická chemie
    Impakt faktor: 2.569, rok: 2008

    A set of filamentous fungi (42 strains) was screened for a-N-acetylgalactosaminidase activity, and a series of inducers and different cultivation conditions were tested. Enzyme production by the best producer Aspergillus niger CCIM K2 was optimized and scaled up. a-NAcetylgalactosaminidase was purified to apparent homogeneity by cation exchange chromatography, gel filtration, and chromatofocusing, and basic biochemical data of the enzyme were determined: The native molecular weight was estimated by gel filtration to be approximately 440 kDa, the molecular weight of the subunit was determined to be 76 kDa and the pI=4.8. The KM was 0.73 mmol/l for onitrophenyl 2-acetamido-2-deoxy-a-D-galactopyranoside (o-NP-a-GalNAc), and optimum enzyme activity was achieved at pH 1.8 and 55 C. This -N-acetylgalactosaminidase is a retaining-type glycosidase, and it was N-deglycosylated without any loss of activity

    Řada vláknitých hub (42 kmenů), série induktorů a kultivačních podmínek byla testována na extracelulární produkci a-N-acetylgalaktosaminidasy. Nejlepším producentem hledaného enzymu byl Aspergillus niger CCIM K2, podmínky kultivace byly optimalizovány. a-N-Acetylgalaktosaminidasa byla purifikována za použití iontoměničové chromatografie (katex), gelové permeační filtrace a chromatofokusace. Byly změřeny základní biochemické parametry purifikovaného enzymu: Nativní molekulová hmotnost 440 kDa (stanoveno pomocí gelové permeační filtrace), molekulová hmotnost podjednotek 76 kDa a pI = 4,8. Při použití substrátu nitrofenyl 2-acetamido-2-deoxy-a-D-galaktopyranosidu (o-NP-a-GalNAc) byla K 0,73 mmol/l, pH optimum 1,8 a teplotní optimum enzymu 55 stupňů C. Purifikovaná a-N-acetylgalaktosaminidasa byla N-deglykosylována bez ztráty enzymové aktivity
    Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0162944